목차
머리말
제1장 단백질실험의 진행방향
1-1 기본적인 실험의 흐름 ... 17
1-2 단백질 실험의 포인트 ... 20
제2장 단백질의 기본적인 실험 조작
1. Buffer(완충액)의 선택 ... 22
1-1 완충액의 선택 ... 22
1-2 Buffer의 조제 예 ... 25
2. 단백질의 안정화 ... 30
2-1 단백질의 구조 ... 30
2-2 안정화 시약 ... 33
3. 단백질 정량법 ... 38
3-1 UV법(280nm) ... 40
3-2 뷰렛 ... 40
3-3 Lowry법 ... 41
3-4 BCA법 ... 42
3-5 Bradford 법 ... 43
제3장 단백질의 추출법
1. 세포의 파괴 및 분획 ... 45
1-1 동물조직 ... 45
1-2 배양세포 ... 56
1-3 효모 ... 67
1-4 식물 ... 72
2. 단백질의 가용화법 ... 77
2-1 생체막성분의 분리 ... 77
2-2 막단백질의 가용화 ... 82
제4장 분리 정제법
1. 정제의 조립방법 ... 87
1-1 정제를 시작하기 전 ... 87
1-2 정제의 진행법 ... 90
2. 황산암모늄분획, 농축, 탈염조작 ... 94
2-1 황산암모늄 분획 ... 94
2-2 유기용매와 산에 의한 단백질의 침전 농축 ... 96
2-3 막 농축(한외여과) ... 99
2-4 기타 농축법 ... 101
2-5 투석 ... 101
3. 저압 Chromatography의 기본 조작 ... 105
3-1 연질 담체의 종류 ... 105
3-2 필요한 장치와 기구 ... 107
3-3 실험 조작 ... 108
4. 중고압액체 Chromatography의 기본조작(FPLC, HPLC 등의 이용) ... 112
4-1 System에 필요한 기계류 ... 113
4-2 조작 ... 116
5. 이온 교환 크로마토그래피 ... 135
5-1 이온교환 chromatography의 원리 ... 135
5-2 실험조건 ... 135
5-3 음이온 교환 HPLC의 실험예 - lamin-5의 정제 ... 140
5-4 연질 gel 이온교환 chromatography ... 143
5-5 그 외 ... 143
6. Gel 여과 chromatography ... 145
6-1 원리와 특징 ... 145
6-2 실험조건 ... 147
6-3 Sepharose 4B를 이용한 gel 여과 chromatography - lamin-5(Rhodopsin)의 정제의 응용 ... 149
6-4 Superdex column을 이용한 gel 여과 HPLC ... 153
6-5 Gel 여과에 의한 탈염 ... 154
7. Affinity Chromatography ... 156
7-1 주요 실험조건 ... 157
7-2 Affinity chromatography의 실제 ... 161
7-3 그 외의 chromatography ... 167
8. 역상 Chromatography ... 169
8-1 중요한 실험 조건 ... 169
8-2 실험 조작 ... 170
제5장 유전자 재조합 단백질의 발현과 정제
1. His-taq 단백질의 발현과 정제 ... 175
1-1 여러가지 발현계 ... 175
1-2 대장균의 파괴와 단백질의 추출 ... 184
1-3 Nikel column의 조제 ... 186
1-4 His-tag 단백질의 용해 ... 189
1-5 His-tag 단백질의 nikel column에서의 용출 ... 193
1-6 Nikel column의 재생과 보존 ... 196
1-7 구체적인 실험예 ... 198
1-8 활성을 회복시키기 위한 재구성법 ... 200
1-9 단백질의 정제를 성공하기 위한 중요한 point ... 200
1-10 Troubleshooting ... 201
2. GST 융합단백질의 발현과 정제 ... 203
3. 봉입체에서의 활성 재생 및 정제 ... 210
4. Baculovirus, 곤충 세포계에서의 재조합 단백질의 발현과 정제 ... 225
4-1 재조합 virus의 제작 ... 227
4-2 재조합 단백질의 발현 및 정제 ... 235
색인 ... 238
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