목차
제1장 단백질 구조해석의 진행방법
1-1 단백질의 분리동정 ... 2
1-2 단백질의 일차 구조 해석법 ... 3
1-3 단백질과학으로부터 유전자공학, 그리고 또 다른 단백질 과학으로 ... 6
제2장 전기 영동법
1. Polyacrylamide gel ... 7
1-1 SDS-polyacrylamide gel 전기영동(SDS-PAGE) ... 7
1-2 단백질의 염색 ... 17
2. Western blotting ... 24
2-1 단백질 membrane의 전사와 Ponceau S 염색 ... 25
2-2 항체와의 반응과 항원의 검출 ... 29
2-3 밴드의 정량 ... 39
3. 이차원 전기 영동법 ... 41
3-1 일차원 전기영동(등전점 전기영동) ... 42
3-2 이차원 전기영동(SDS-PAGE) ... 52
4. SDS-PAGE에 의한 단백질의 정제법 ... 61
4-1 확산법에 의한 추출법 ... 62
4-2 전기영동 용출법 ... 66
4-3 조제용 전기영동장치 ... 70
제3장 Peptide Mapping
1. SDS-PAGE상에서의 일차원 mapping ... 73
1-1 Protease(gly-brand mapping) ... 73
1-2 CNBr분해 ... 79
2. TLC상에서의 이차원 Mapping ... 82
2-2 면역침강. 전기영동. 막에 전사 ... 86
2-3 Trypsine digest에 의한 인산화 peptide map ... 88
제4장 일차구조결정법
1. 단백질의 일차구조해석 ... 97
1-1 원리 ... 98
1-2 Squencing을 위한 시료 조제 ... 99
1-3 N말단 아미노산 배열분석 ... 103
1-4 Peptide map과 내부 아미노산 배열분석 ... 106
1-5 결론 ... 114
2. Gel의 전기영동으로 분리한 단백질의 해석 ... 116
2-1 SDS-PAGE에 의한 분리와 electroprotein ... 116
2-2 PVDF막상 단백질의 염색 ... 122
2-3 PVDF 막 위의 단백질의 환원 S-alkyl화와 protease의 digest ... 124
2-4 PVDF 막 위에서 단백질의 계통적 절단화 ... 131
3. Proteome 해석 ... 136
3-1 Proteome 해석 개론 ... 134
3-2 Immobiline을 이용한 2차원 전기 영동법 ... 139
3-3 질량분석에 의한 단백질 동정 ... 149
제5장 수절단백질의 분석
1. 단백질의 번역 후 수절 ... 157
1-1 번역 후 수식분석의 의의 ... 157
1-2 해석 후 수식의 종류 ... 158
2. 인산화 ... 162
2-1 [<TEX>$$^{32}P$$< / TEX>] 정인산을 이용한 세포의 표식 ... 162
2-2 인산화 단백질의 검출 ... 167
2-3 인산화 아미노산의 분석 ... 171
2-4 항체와 효소를 이용한 인산화 검출법 ... 176
3. 당쇄 ... 182
3-1 렉틴을 이용한 해석 ... 182
3-2 당쇄의 절단 ... 186
3-3 당쇄의 구조해석 ... 187
제6장 특이항체에 의한 항원단백질의 분리와 검출
1. 항체 column에 의한 단백질의 정제 ... 195
1-1 실험조작의 개략 ... 195
1-2 항체 column의 제작 ... 197
1-3 항체 affinity chromatography의 조작법 ... 200
2. 면역침강법 ... 205
2-1 일반적인 방법과 원리 ... 205
2-2 면역 침강법을 이용한 인산화 단백질의 검출 ... 209
3. 면역 염색법 ... 217
3-1 중요한 실험조건 ... 217
3-2 Foremalin고정·Paraffin 절편의 염색 ... 221
3-3 배양세포를 이용한 염색 ... 228
3-4 Troubleshooting ... 233
부록 ... 234
색인 ... 241
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