제1장 연구개발과제의 개요(Outline of research development project) ... 13 제1절 연구개발의 목적(Aims of research development) ... 13 제2절 연구개발의 필요성 및 범위(Necessity and categories of research development) ... 13 제2장 국내외 기술개발 현황(The present conditions of domestic or outside the country for research development) ... 18 제3장 연구 개발 수행 내용 및 결과(Contents and results of research project) ... 20 제1절 서론(Preface) ... 20 제2절 초석잠 추출물의 항균 활성(Antimicrobial activity of extract of Stachys sieboldii.) ... 21 1. 재료 및 실험 방법(Material and method) ... 22 가. 재료(Extraction of sample) ... 22 나. 시료의 추출(Minimum inhibition concentration(MIC) of fraction) ... 22 다. 분획물의 미생물에 대한 생육저해효과(Is antibacterial activity of extract) ... 24 라. 초석잠 추출물의 1차 항균효과(Measurement of β-galactosidase activity) ... 25 제3절 초석잠 추출물의 활성산소 소거능(Scavenging activity of active oxygen by superoxide dismutase(SOD)) ... 26 1. 재료 및 실험 방법(Material and method) ... 26 가. 재료(Material) ... 26 나. 실험 동물 및 사료 조성(Animal experiment and composition of diets) ... 26 다. Superoxide dismutase(SOD) 활성 측정(Measurement of superoxide dismutase(SOD)) ... 26 라. Peroxide value(POV) 측정(Measurement of peroxide value(POV)) ... 27 마. 지질과산화 측정(Measurement of lipid peroide) ... 27 제4절 초석잠 추출물의 산화스트레스 억제 효과(Inhibitory effect of oxidative stress by extraction of Stachys sieboldii) ... 28 1. 재료 및 실험 방법(Materials and method) ... 28 가. 조제사료의 조성(Composition of diets) ... 28 나. 콜레스테롤의 함량 측정(Measurement of cholesterol level) ... 29 다. 세포막 유동성의 측정(Measurement of cell menbrame fluidity) ... 29 라. 기초 및 유도산소라디칼의 정량(Quantative test of basic and derived free oxygen radical) ... 29 마. 산화적 스트레스의 분석(Analysis of oxidative stress) ... 30 제5절 초석잠 추출물의 LDL에 대한 항산화 활성(Antioxidative activity of Stachys sieboldii extracts for human LDL) ... 30 1. LDL의 수식에 대한 항산화 작용(Antioxidative activity of LDL) ... 30 가. 사람 Low Density Lipoprotein(LDL)의 분리(Seperation of human LDL) ... 30 나. Macrophage의 분리와 배양(Cultivation of macrophage) ... 30 다. LDL의 금속유도에 의한 산화(LDL oxidation by mediated metal) ... 30 라. Thiobarbituric acid reacting substances(TBARS)의 측정(Measurement of thiobarbituric acid reacting substance(TBARS)) ... 31 마. Diene conjugation의 측정 ... 31 바. 단백질의 정량 ... 31 사. 통계 처리 ... 31 제6절 초석잠 추출물의 항균 활성의 연구 수행 결과(Research result of antimicrobial activity by Stachys sieboldii) ... 32 1. 초석잠 및 에탄올 추출물의 유기용매 분획별 수율(Fraction yield of organic solvent fraction obtained from Stachys sieboldii) ... 32 2. 초석잠 잎 에탄올 추출물의 항균검색(Screening test of ethanol fraction) ... 32 3. 초석잠 잎 분획물의 향균성 검색(Screening test of fractions) ... 32 4. 초석잠의 잎 분획물의 최소 저해 농도 및 생육 저해 효과(Minimum inhibition concentration of microbials) ... 34 5. 시험 대상균주의 생육저해 스펙트럼(Inhibition of growth spectrum) ... 34 6. 초석잠 잎 핵산 분획물의 1차 column chromatography 소획분들의 항균 효과(Antimicrobial activity of 1st column chromatography fraction) ... 35 7. 초석잠 잎 핵산 분획물의 2차 column chromatography로 부터 얻은 소획분들의 항균 효과(Antimicrobial activity of 2nd column chromatography fraction) ... 36 8. 초석잠잎의 핵산분획물의 3차 PTLC 후 얻은 소획분들의 항균효과(Antimicrobial activity of 3rd fraction) ... 39 9. F7-2-5 획분 처리시 세포의 형태변화(Cell changes of cell morphology) ... 41 10. β-galactosidase 활성측정(Activity of β-galactosidase) ... 41 11. 초석잠 잎 분획물의 열 및 pH 안정성(Stability of thermal and pH) ... 41 제7절 초석잠 추출물의 SOD 활성의 결과(Result of SOD activity of Stachys sieboldii) ... 44 1. SOD 활성 비교(SOD activity) ... 44 2. 과산화 지질의 억제효과(Inhibition of lipid peroxide) ... 44 3. 항산화계 효소의 활성(Activity of antioxidative enzyme system) ... 46 제8절 초석잠 추출물의 항산화 스트레스 억제 효과(Inhibition effects of oxidative stress) ... 51 1. 간장 콜레스테롤 함량의 변화(changes of contents of liver cholesterol) ... 51 2. 세포막 유동성의 평가(Estimation of basic or derived oxygen free radical) ... 52 가. 세포막 유동성(Membrane fluidity : MF) ... 52 나. 기초 및 유도산소라디칼의 평가(Estimation of basic or derived oxygen free radical) ... 53 다. 과산화 지질의 생성 억제 효과(Inhibition effect of lipid peroxide) ... 54 제9절 초석잠 추출물의 LDL에 대한 항산화 활성(Antioxidative activity of human LDL) ... 56 1. 초석잠 추출물의 사람 LDL에 대한 항산화 효과(Antioxidative effect of human LDL) ... 56 2. LDL의 산화에 따른 electrophoretic mobility(Electrophoretic mobility of LDL) ... 58 3. 초석잠 추출물과 다른 항산화제와 비교(Comparision of antioxidative activity) ... 58 제10절 초석잠 추출무의 항암 및 면역 효과(협동과제: 초석잠으로부터 활성산소소거 물질의 분리)(Antitumor effect of Stachys sieboldii) ... 60 1. 서론(Prefaces) ... 60 2. 재료 및 방법(Materials and method) ... 61 가. 재료(Material) ... 62 1) 초석잠 추출물의 조제(Preparation of Stachys sieboldii extraction) ... 61 2) 실험 동물(Animal experiment) ... 61 3) 초석잠 추출물의 마우스에 대한 공급(Animal diets) ... 61 4) 정상 면역 세포의 증식에 미치는 초석잠 잎 추출물의 영향 측정(Measurement of growth of normal cells) ... 62 5) 암세포 및 정상면역세포에 대한 세포독성 측정(Cytotoxicity of cancer cell or normal cells) ... 62 6) T림프구 아형(T-lymph) ... 62 7) 대식세포에 의한 Nitric Oxide(NO)생산 측정(Measurement of nitric oxide) ... 62 8) Tumor necrosis factor(TNF)의 역가 측정(measurement of tumor necrosis factor) ... 63 9) 대식세포의 탐식능 측정(Measurement of fluorrasent microbials) ... 63 10) 흑색종 세포(B16F10)의 폐전이 실험(Tumor respiratory test) ... 63 제11절 초석잠 뿌리 추출물의 항산화 활성(Antioxidative activity of root of Stachys sieboldii) ... 63 1. 재료 및 방법(Material and method) ... 63 가. 재료(Material) ... 63 나. 시료의 추출(Extraction of Stachys sieboldii) ... 64 1) Total polyphenols 과 flavonoids 함량 측정(Measurement of total phenols) ... 64 2) DPPH에 의한 수소 공여능 측정(Hydrogen donor by DPPH) ... 64 3) 과산화 지질 형성 억제능 측정(Measurement of inhibition of lipid peroxide) ... 65 4) 아질산염 소거능 측정(Measurement of nitrite scavenge) ... 65 5) 칼럼 크로마토그래피(Isolation by columne chromatography) ... 65 6) 박층 크라마토그래피 ... 65 7) 기기 분석에 의한 구조 확인 ... 66 제12절 항암 및 면역효과의 결과 및 고찰(Results of anticancer or immuno modulator by Sachys sieboldii) ... 66 1. 초석잠 추출물이 세포증식에 미치는 영향(Effect of cell growth) ... 66 2. 추석잠 잎 추출물 투여가 T세포아군의 변화에 미치는 영향(Effect of T-lymph) ... 68 3. 초석잠 추출물이 복강대식세포의 NO 및 TNF-α 생산에 미치는 영향(Effect of No : TNF-α production) ... 69 4. 초석잠 추출물이 암세포의 폐전이에 미치는 영향(Effect of tumor respiration) ... 70 제13절 항산화 활성에 대한 결과 및 고찰(Results of antioxidation) ... 71 1. 초석잠 메타놀 추출물의 수율(Yield of extraction of Stachys sieboldii) ... 71 2. DPPH에 의한 항산화 활성도 측정(Antioxidatively activity by DPPH) ... 72 3. 과산화 지질(linoleic acid) 형성 억제능 측정(Inhibition effect of lipid peroxide) ... 73 4. 아질산염소거능 측정(Scavenging effect of nitrite) ... 74 5. 박층 크라마토그래피를 이용한 칼럼 크로마토그래피 분획물의 분리(Seperation of firaetion by column chromatography) ... 75 6. 칼럼 크로마토 그래피를 이용한 에틸아세테이트 추출물의 분리 및 항산화 활성 측정(Antioxidative activity of substanceby column chromatography) ... 76 7. 기기분석에 의한 구조확인(Chemical struction of fraction) ... 80 제4장 연구개발 목표의 달성도 및 관련분야에의 기여도(Achievement degree of aims and relative contribution) ... 86 제5장 연구개발결과의 활용계획(Utilization plan of research results) ... 88 제6장 해당사항 없음(Abroad scientific information by research development process) ... 88 제7장 참고문헌(References) ... 89