목차
요약문(Abstract) ... 2
영문요약서(Summary) ... 16
제1장 연구개발 과제의 개요(Introduction) ... 45
제1절 연구개발의 목적 ... 45
제2절 연구개발의 필요성 ... 46
제3절 국내·외 관련기술의 현황과 문제점 ... 47
제2장 국내·외 기술개발 현황(The Present Technical State) ... 50
제3장 연구수행 내용 및 결과(Materials and Results) ... 55
제1절 배의 생리기능물질의 분리 및 정제(The isolation of biologically activated compounds from pear) ... 55
1. 실험방법 및 연구내용(Method and scope) ... 55
가. 배의 아세톤 추출물의 분리(Isolation of acetone extracts of pear) ... 55
나. Thiolysis에 의한 thiolether 유도체 형성 및 정제(Isolation and thiolysis of the derivatives) ... 55
다. 탈류환원 반응(Desulfurization) ... 55
라. 흡광 분포도 측정(UV-spectrum of acetone extract of pear) ... 56
마. TLC에 의한 polyphenol류의 동정(Identification of polyphenol compound by TLC) ... 56
바. 생리 활성물질의 분리 및 정제(Isolation of biologically activated compounds) ... 56
1) Sephadex LH-20에 의한 정제(Sephadex LH-20) ... 56
2) MCI-gel CHP 20P에 의한 정제(MCI-gel CHP 20P) ... 56
3) Octadecyl silica gel(ODS)에 의한 분리(Octadecyl silical gel(ODS)) ... 56
4) Toyoperal HW 40(TSK gel) ... 57
5) Bondapack <?import namespace ... m ur
사. 저해물질이 부분정제(Isolation of biologically activated part of compounds) ... 57
아. High perfermance liquid chromatography(HPLC)에 의한 polyphenol 화합물의 동정(Isolation of polyphenol compounds on pear by HPLC) ... 57
자. 효소 저해활성 측정(Inhibition of enzyme activity) ... 57
1) Glucosyltransferase(Gtase) ... 57
2) Tyrosinase ... 58
3) Xanthine oxidase ... 58
4) Angiotensin converting enzyme(ACE) ... 59
2. 연구개발 결과(Results) ... 59
가. 배의 아세톤 추출물의 분리(Isolation of acetone extract of pear) ... 59
나. 아세톤 추출물에 의한 효소저해 작용(Inhibition of enzyme activity of acetone extract) ... 59
다. 저해물질의 부분정제에 관한 수율(Yield of Inhibitor on isolated polyphenol compound) ... 63
라. 부분정제에 의한 효소저해효과(Inhibition of enzyme activity on polyphenol compound) ... 64
마. Polyphenol 화합물의 분리 및 정제(Isolation of polyphenol compound from pear) ... 68
3. 적요(Abstract) ... 76
제2절 배의 생리활성 물질의 면역기능(Immunofunction of biologically activated compounds) ... 78
1. 실험방법 및 연구내용(Methods and scope) ... 78
가. 시료투여 및 면역 유발과정(Sample administration and procedure of antigen challenge) ... 78
나. 복강내 침출세포(Peritoneal exudative cells, PEC) 조제(Preparation of peritoneal exudative cells) ... 78
다. 비장세포(Spleen cells)(Preparation of spleen cells) ... 79
라. Thymus cell 부유액 조제(Preparation of thymus cell) ... 79
마. 세포성 면역실험(Cell mediated immunity tests) ... 79
1) Plague forming cell(PFC) 측정(Plague forming cell) ... 79
2) 비장세포의 Rosette forming cell(RFC)의 검출(Rosette forming cell) ... 79
3) 항체 생산능 측정(Antibody production) ... 80
바. Macrophage계 세포 활성능(Cell activation of macrophage) ... 80
1) 탐식능 측정(Phagocytic activity) ... 80
사. 알레르기 관련 실험(Allergy tests) ... 80
1) 알레르기 항원 조제(Preparation of antigen) ... 80
2) PCA(Passive cutaneous anaphylaxis) 실험(PCA(Passive cutaneous anaphylaxis) test) ... 81
3) 혈중 histamine 측정(Histamine on blood) ... 81
2. 연구개발의 결과(Results) ... 81
가. 배의 추출물의 용혈반 형성에 미치는 영향(Effect of pear extract on phagocytic activity of spleen cells) ... 81
나. 배의 추출물의 rosette 형성에 미치는 영향(Effect of pear extract by hemolytic plaque forming cell assay) ... 84
다. 배의 추출물의 세포증식에 미치는 영향(Effect of pear extract on roselte forming cells) ... 86
라. 배의 추출물의 수동피부아나필락시스 저해 효과(Activity of spleen cell in a culture medium containing extract of from pear) ... 88
마. 배의 추출물의 히스타민 억제 효과(Effect of pear extract on histamine) ... 91
3. 적요(Abstract) ... 92
제3절 배의 착즙 전처리 조건설정 및 배를 이용한 액상차의 개발(Establishment of pre-pressing condition on quality of pear juice and development of tea type product ... 93
1. 실험방법 및 내용(Methods and scope) ... 93
가. 배의 착즙을 위한 전처리조건 검토(Investigation of pre-processing condition for pear juice) ... 93
나. 배의 갈변 방지를 위한 첨가제 선정 시험(Screening of treatments for anti-browning on pear juice) ... 93
다. 첨가제 종류 및 저장기간에 따른 갈변 저해효과 비교시험(Comparison of anti-browning effect on treatment and storage time) ... 93
라. 배를 이용한 액상차의 개발(Development of tea type product using of pear) ... 93
마. 배와 생약재를 이용한 혼합 액상차의 개발(Development of mixing tea type product using of pear and herbs) ... 94
바. 생약재 적정 추출조건 설정(Optimum extraction condition for herbs) ... 94
사. 착즙수율(Yield) ... 94
아. pH ... 94
자. 가용성 고형물(Soluble solid content) ... 94
차. 탁도(Turbidity) ... 95
카. 색도(Color) ... 95
타. 비타민 C(Vitamin C content) ... 95
파. 유리당(Free sugar content) ... 95
하. 산도(Acidity content) ... 96
갸. 아질산염 소거작용(Nitrite scavenging ability) ... 96
냐. Tyrosinase 저해효과(Tyrosinase inhibitory effect) ... 97
댜. 폴리페놀 함량(Polyphenol content) ... 97
랴. 전자공여 작용(Electron donating ability) ... 97
2. 연구개발 결과(Result) ... 98
가. 배의 착즙을 위한 전처리조건 검토(Establishment of pre-pressing condition of pear juice) ... 98
1) 착즙 수율(Yield) ... 98
2) pH ... 99
3) 가용성 고형물(Soluble solid content) ... 100
4) 탁도(Turbidity) ... 101
5) 색도(Color) ... 102
나. 배의 갈변 방지를 위한 첨가제 선정 시험(Screening of treatments for anti-browning on pear juice) ... 104
1) Ascorbic acid 첨가(Addition of ascorbic acid) ... 104
2) Cysteine 첨가(Addition of cysteine) ... 111
3) NaHSO₃첨가(Addition of NaHSO₃) ... 119
다. 첨가제 종류 및 저장기간에 따른 갈변 저해효과(Comparison of anti-browning effect on treatment and Storage time) ... 128
라. 배를 이용한 액상차의 개발(Development of tea type product using pear) ... 139
1) 음료제조(Product of beverage) ... 139
가) 농축조건 설정(Preparation of pear juice concentration) ... 139
나) 적정 배합비 선정(Preparation of combination ratio) ... 140
3. 적요(Abstract) ... 143
제4절 배의 저장기간에 따른 성분변화 및 생리활성물질의 화학구조 결정(Changes of pear during storage and chemical Structure of biologically activated compounds from pear) ... 144
1. 실험방법 및 연구내용(Methods and scope) ... 144
가. 배의 저장기간에 따른 성분변화(Changes of in pear during storage) ... 144
1) 수분함량 및 pH(Moisture and pH) ... 144
2) 유리당(Free sugar) ... 144
3) 유기산(Organic acid) ... 144
4) polyphenol 함량(Polyphenol) ... 146
나. 배의 polyphenol 화합물의 구조결정 ... 147
1) Nuclear magnetic resonance(NMR)에 의한 구조해석 ... 147
2) Mass spectrum에 의한 분자량 측정 ... 147
다. 배의 polyphenol 화합물의 생리활성 검증 ... 147
1) Angiotensin converting enzyme(ACE) 저해 ... 147
2) Xanthine oxidase 저해 ... 148
3) Tyrosinase 저해 ... 148
4) 항산화 활성측정 ... 149
가) Thiobarbituric acid reactive substances(TBARS) 측정 ... 149
나) 전자공여능 측정 ... 149
2. 연구 개발 결과 ... 150
가. 배의 저장에 따른 성분변화 ... 150
1) 수분함량 및 pH 변화 ... 150
2) 유리당 함량의 변화 ... 150
3) 유기산 함량의 변화 ... 150
4) Polyphenol 함량의 변화 ... 151
나. Polyphenol 화합물의 구조분석(Chemical structure of biologically activated compound) ... 157
1) Compound A ... 157
2) Compound B ... 161
3) Compound C ... 165
4) Compound D ... 169
다. 배의 polyphenol 화합물의 생리활성 검증(Inhibition of enzyme activity) ... 173
1) Angiotensin converting enzyme(ACE) 저해(Angiotensin converting enzyme(ACE)) ... 173
2) Xanthine oxidase 저해(Xanthine oxidase) ... 175
3) Tyrosinase 저해(Tyrosinase) ... 177
3. 적요(Abstract) ... 179
제5절 배의 생리활성물질의 항산화효과 및 superoxide dismutase 활성화(Effect of antioxidation and superoxide dismutase biologically activated compounds) ... 181
1. 실험방법 및 연구내용(Methods and scope) ... 181
가. 석유에테르 추출물 제조(Preparation of ether extract) ... 181
나. 전자공여능에 의한 항산화 측정(Electron donation ability) ... 181
다. SOD(superoxide dismutase)-유사활성 측정(Superoxide dismutase) ... 181
라. 세포 배양(Incubation of cell) ... 182
마. 리보좀 제조(Preparation of ribosome) ... 182
바. 암세포 증식억제효과(MTT assay) ... 183
사. 지방산 분석(Analysis of fatty acid) ... 183
2. 연구개발의 결과(Results and discussion) ... 184
가. 석유에테르 추출물 제조(Preparation of ether extract) ... 184
나. 항산화 효과(Effect of antioxidative of biologically activated compound) ... 184
1) TBARS법에 의한 유지산화(TBARS) ... 184
2) 전자공여능에 미치는 영향(Electron donation ability) ... 185
다. SOD(Superoxide dismutase)-유사활성 측정(Superoxide dismutase like activity of polyphenol isolated pear) ... 185
라. 암세포 증식억제 효과(MTT assay)(Inhibition effect of polyphenol compound from pear on the breast adenocarcinoma cell) ... 186
3. 적요(Abstract) ... 196
제6절 배와 생약재를 이용한 혼합 액상차의 개발 및 생약재 적정 추출조건 설정(Preparation of tea-type pear product and optimum Extraction condition for herbs) ... 197
1. 배와 생약재를 이용한 혼합 액상차의 개발(Preparation of tea type product using pear) ... 197
가. 배 액상차 제조(Product of tea type pear product) ... 197
1) 계피맛 배음료 제조(Cinnamon flavor pear product) ... 197
가) 부재료 선정 및 배합비 결정 ... 197
2) 대추맛 배음료 제조(Jujube flavor pear product) ... 202
가) 부재료 선정 및 배합비 결정 ... 202
3) 생강맛 배음료 제조(Ginger flavor pear product) ... 207
가) 부재료 선정 및 배합비 결정 ... 207
2. 생약재 적정 추출조건 설정(Optimum extraction condition for herbs) ... 211
가. 생약재의 적정 추출조건 설정(Optimum extraction condition for herbs) ... 211
나. 열수 추출(Water extract) ... 212
다. 50% 에탄올 추출(50% ethanol extract) ... 213
라. 75% 에탄올 추출(75% ethanol extract) ... 214
마. 산도(Acidity) ... 215
바. 탁도(Turbidity) ... 216
사. 색도(Color) ... 219
아. 유리당(Free sugar content) ... 223
3. 생약재의 기능성 성분 탐색(Screening of physiological activity from wild herb extracts) ... 224
가. 아질산염 소거작용(Nitrite scavenging ability) ... 224
나. Tyrosinase(polyphenol oxidase, PPO) 저해작용(Tyrosinase inhibitory effect) ... 227
다. 폴리페놀 함량(Polyphenol contents) ... 228
라. 전자공여 작용(Electron donating ability) ... 229
4. 적요(Abstract) ... 231
제7절 배의 free radical scavenging물질 탐색 및 항암효과(Investigation into biologically activated free radical of descavenging and effect of anticancer) ... 232
1. 실험방법 및 연구내용(Method and scope) ... 232
가. Free radical scavenging 물질탐색(Free radical scavenging) ... 232
1) Thiobarbituric acid reactive substances(TBARS) 분석(TBARS) ... 232
2) 비햄철(Nonheme) 측정(Nonheme iron) ... 232
3) Ascorbic acid 측정(Ascorbic acid) ... 233
나. Oil emulsion과 deoxyribose에 의한 hydroxyl radical 생성물질 탐색(Effect of anticancer) ... 233
1) Oil emulsion 제조(Preparation of oil emulsion) ... 233
2) Polyphenol oil emulsion 시료제조(Preparation of polyphenol oil emulsion) ... 233
3) 전자공여능 측정(Electron donation ability) ... 233
다. 리보좀 캐리어로서 Sarcoma 180에 의한 항암효과(Effect of anti-cancer by sarcoma 180) ... 234
1) Sarcoma 180 세포 배양 ... 234
2) Sarcoma 180의 복수암 유발 ... 234
3) 시료 투여 ... 234
4) 체중증가량 측정 ... 234
2. 연구개발의 결과 ... 235
가. Free radical scaveng 물질 탐색 ... 235
1) 비햄철(Nonheme iorn) 측정 ... 235
2) Ascorbic acid 측정 ... 236
나. Oil emulsion에 따른 hydroxyl radical 생성물질탐색 ... 237
1) Oil emulsion 제조 ... 237
2) 전자공여능 측정 ... 238
3) TBARS에 의한 H₂O₂함량 측정 ... 239
다. 암세포 증식에 미치는 영향 ... 241
라. Sarcoma 180에 의한 항암 효과 ... 241
3. 적요(Abstract) ... 247
제8절 배의 생리활성물질의 지질대사에 미치는 영향(Effect of lipid metabolism of biologically activated compounds) ... 248
1. 실험방법 및 연구내용(Methods and scope) ... 248
가. 실험동물 및 식이(Animals and basal diet) ... 248
나. 혈장, 간장, 지방조직 및 분변 채취(Picking of liver, kidney and femur in experimental rats) ... 248
다. 혈장중의 지질분석(Lipid analysis on serum) ... 250
1) 총 지질의 분석(Total lipids) ... 250
2) 총 콜레스테롤의 분석(Total cholesterol) ... 250
3) Triglyceride(중성지질) 측정(Triglyceride) ... 250
4) HDL-콜레스테롤 측정(HDL-cholesterol) ... 250
5) LDL-콜레스테롤 측정(LDL-cholesterol) ... 251
라. 총 단백질 및 알부민 정량(Assay of total protein and albumin) ... 251
마. 간장 및 분변 중에서 각종 지질 정량(Lipid analysis on liver and femur) ... 251
바. 유의성 검정(Statistical analysis) ... 251
2. 연구개발의 결과(Results and discussion) ... 251
가. 총 지질 분석(Effect of polyphenol compound extracts pear on serum total lipid in rats fed high fat diet) ... 251
1) 혈청, 간장 및 분변 중의 지질분석 ... 251
나. 총 콜레스테롤 함량(Effect of polyphenol compound extracts from pear on serum total cholesterol in rats fed high fat diet) ... 252
다. 중성지질 함량 측정(Effect of polyphenol compound extracts from pear on serum liver and fecal triglyceride in rats fed high fat diet) ... 252
라. HDL-cholesterol 함량 측정(Effect of polyphenol compound extracts from on serum HDL-Cholesterol in rats fed high fat diet) ... 253
마. LDL-cholesterol 함량 측정(Effect of polyphenol compound extracts from pear on serum liver and fecal LDL-cholesterol in rat fed high fat diet) ... 253
바. 혈청 중 총 단백질과 알부민 함량 측정(Effect of polyphenol compound extracts from pear on serum total protein in rats fed high fat diet) ... 254
3. 적요(Abstract) ... 267
제9절 배를 이용한 타블렛 제품의 제조(Preparation of pear tablet) ... 268
1. 배 추출 및 농축조건 설정(Extraction and concentration of pear) ... 268
2. 타블렛 제조 적정 배합비 결정(Optimum combination ratio for pear tablet) ... 268
3. 타블렛 제조공정(Preparation process for pear tablet) ... 268
4. 배 타블렛 제품의 개발(Preparation of pear tablet) ... 269
5. 적요(Abstract) ... 273
제4장 목표달성도 및 관련분야에서의 기여도(Object achievement) ... 274
제1절 목표달성도 ... 274
제2절 관련분야 기여도 ... 277
제5장 연구개발 결과의 활용 계획(Application) ... 279
제6장 연구개발 과정에서 수집한 해외 과학기술 정보(Technical information of foreign countries) ... 281
제7장 참고 문헌(Reference) ... 285
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