목차
〈식물편〉
Ⅰ. 분자 생물학 연구의 현재와 미래 ... 31
Ⅱ. 유전자 조작 기초 기술 ... 36
1. 유전공학에 이용되는 효소의 관리 및 이용 ... 36
1.1 제한효소 ... 36
1.1.1 효소의 단위 ... 36
1.1.2 염농도 ... 37
1.1.3 반응온도 ... 37
1.1.4 DNA 농도 ... 37
1.1.5 기타 주의사항 ... 37
1.2 변형효소(Modifying enzyme) ... 41
1.2.1 연결효소(Ligase) ... 41
1.2.2 Cohesive-end ligation ... 42
1.2.3 Blunt-end ligation ... 42
1.3 그 외의 변형효소 ... 42
1.3.1 Polynucleotide kinase ... 42
1.3.2 Alkaline phosphatase ... 43
1.3.3 DNA polymerase ... 44
1.3.4 RNA polymerase ... 44
1.3.5 DNA topoisomerase Ⅰ ... 44
1.3.6 Nuclease ... 46
2. 핵산분리 및 확인 ... 46
2.1 Plasmid 분리 ... 46
2.1.1 소량정제법 ... 48
2.1.1.1 알칼리 용해 방법 ... 48
2.1.1.2 TNE 방법 ... 49
2.1.2 대량정제법 ... 49
2.1.2.1 PEG 침전을 이용한 방법 ... 49
2.1.2.2 CsCl-EtBr gradients를 이용한 closed circular DNA 분리 방법 ... 51
2.2 식물체 DNA 분리 ... 52
2.2.1 Genomic DNA ... 52
2.2.1.1 식물 DNA 분리 방법 ... 54
2.2.1.2 미소기관 DNA 분리 ... 56
2.2.1.2.1 Chloroplast DNA 분리 ... 56
2.2.1.2.1.1 Sucrose step gradient method(Method Ⅰ) ... 56
2.2.1.2.1.2 Proteinase K를 이용한 방법(Method Ⅱ) ... 58
2.2.1.2.2 Mitochondria DNA 분리 ... 59
2.2.1.2.2.1 Mitochondria 분리 ... 59
2.2.1.2.2.2 Mitochondrial DNA 분리 ... 60
2.3 RNA 분리 ... 61
2.3.1 Total RNA 분리방법 Ⅰ ... 62
2.3.2 RNA 분리방법 Ⅱ ... 63
2.3.3 Phend 화합물을 많이 함유한 식물체에서의 RNA 분리 ... 64
2.3.4 Poly(<NOBR><?import namespace ... m ur
2.3.5 Magnetic bead를 이용한 mRNA 분리 ... 67
2.3.6 RNA 전기영동 ... 68
2.3.7 RNA 정량 ... 69
3. 유전자은행 제작(cDNA, genomic DNA) ... 69
3.1 cDNA 유전자은행 제작 ... 69
3.1.1 cDNA 합성에 사용되는 주요 재료 ... 70
3.1.2 cDNA 은행 제작 ... 71
3.1.2.1 First strand cDNA synthesis ... 71
3.1.2.2 Second strand synthesis ... 72
3.1.2.3 Blunting the cDNA termini ... 73
3.1.2.4 EcoRI adaptor의 부착 ... 73
3.1.2.5 Kinasing the EcoRI ends ... 74
3.1.2.6 XhoI digestion ... 74
3.1.2.7 Size fractionation ... 74
3.1.2.8 UNI-ZAP XR vector arm에 cDNA의 연결 ... 75
3.1.2.9 Packaging ... 75
3.1.2.10 Planting과 titering ... 76
3.1.2.11 유전자은행 증폭 ... 76
3.2 Genome 유전자은행 작성 ... 77
3.2.1 Replacement vector와 부분 절단된 genomic DNA 단편을 이용한 genomic library 제작 ... 78
3.2.1.1 Genomic DNA의 제한효소 처리 예비실험 ... 78
3.2.1.2 DNA의 CIAP 및 Klenow 효소 처리 ... 79
3.2.1.3 부분 절단된 DNA의 크기별 분리 ... 79
3.2.1.4 Ligation 및 packaging ... 80
3.2.1.5 Package한 library의 증식 ... 81
3.2.1.6 Titer 결정 ... 82
4. 탐침 probe 제작 ... 83
4.1 Nick-translation ... 84
4.2 Random-primer labeling ... 86
4.3 Bacteriophage RNA polymerases를 이용한 표지 ... 88
4.4 말단표지법(End-labeling) ... 89
4.4.1 T4 polynucleotide kinase를 이용한 말단 표지 ... 90
4.4.1.1 5'-end labeling with T4 polynucleotide kinase : forward reaction ... 91
4.4.1.2 5'-end labeling with T4 polynucleotide kinase : exchange reaction ... 92
4.4.2 Klenow fragment를 이용한 말단 표지 ... 92
4.4.3 T4 DNA polymerase를 이용한 말단 표지 ... 94
4.4.4 Terminal deoxynucleotidyl transferase를 이용한 말단 표지 ... 94
5. DNA 염기서열 분석 ... 95
5.1 염기서열 결정 반응 ... 97
5.1.1 DNA 변성(Alkali 법) ... 98
5.1.2 Annealing 반응 ... 98
5.1.3 Labeling 반응 ... 99
5.1.3.1 T7 DNA polymerase 이용 ... 99
5.1.3.2 Tag DNA polymerase 이용 ... 99
5.1.4 Termination(종결) 반응 ... 100
5.1.4.1 T7 DNA polymerase 이용 ... 100
5.1.4.2 Taq DNA polymerase 이용 ... 100
5.2 전기영동 ... 100
5.2.1 Gel판 준비 ... 101
5.2.2 Gel 만들기 ... 101
5.2.3 전기영동 ... 102
5.2.4 Autoradiography ... 103
5.2.5 염기서열 결정 결과분석 ... 104
6. 유전자 확인 방법 ... 105
6.1 PCR 및 PCR-gel blot 분석 ... 105
6.2 Genomic DNA Southern blot hybridization ... 106
6.3 Northern blot hybridization ... 108
6.4 수용성 단백질의 전기영동 및 western blot ... 108
6.5 후대의 항생제 저항성 검정을 통한 유전자 확인 ... 109
7. 단백질 분리 및 정제 기술 ... 110
7.1 단백질 분리 및 정제 ... 110
7.1.1 조단백질 분리 ... 110
7.1.1.1 Homogenization ... 110
7.1.1.2 초음파 분해(Sonication) ... 111
7.1.1.3 연마제를 이용한 방법 ... 111
7.1.1.4 기타 ... 111
7.1.2 단백질 농축 ... 112
7.1.2.1 황산 암모니아를 사용하는 방법 ... 112
7.1.2.2 Aceton을 이용한 농축 ... 112
7.1.2.3 Ultrafiltration ... 113
7.1.2.4 기타 ... 113
7.1.3 단백질 정량 ... 114
7.1.3.1 Bradford 방법 ... 114
7.1.3.2 Bicinchoninic acid(BCA) 방법 ... 114
7.1.4 이온 교환 크로마토그래피(Ion exchange chromatography) ... 115
7.1.4.1 이온 교환 수지 ... 115
7.1.4.2 컬럼(Column) ... 116
7.1.4.3 방법 ... 116
7.1.5 젤 투과 분리법(Gel permeation chromatography) ... 118
7.1.5.1 젤 크로마토그래피의 장점 ... 118
7.1.5.2 각종 젤의 특성 ... 119
7.1.5.3 Gel chromatography에 의한 단백질의 분리 ... 120
7.1.6 친화성 크로마토그래피(Affinity chromatography) ... 121
7.1.6.1 효과적인 친화성 크로마토그래피 ... 121
7.1.6.2 여러 가지 ligand의 고정 방법 ... 121
7.1.6.3 상업용 친화성 크로마토그래피 ... 122
7.2 단백질 전기영동(SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis) ... 123
7.2.1 SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE) ... 123
7.2.1.1 젤 농도 및 두께별 시약 혼합 ... 124
7.2.1.2 미니젤 전기영동장치 조립 및 젤 조제 ... 125
7.2.1.3 시료준비 및 주입 ... 125
7.2.1.4 전기영동과 gel 염색 및 탈색 ... 126
7.2.2 등전점 전기영동(Isoelectric focusing : IEF) ... 126
7.2.2.1 Ampholyte 선택 ... 127
7.2.2.2 단백질의 변성 조건으로 등전점 분리용 젤 조제 ... 127
7.2.2.3 시료준비 및 주입 ... 128
7.2.2.4 전기영동 ... 128
7.2.2.5 전기영동 후 젤염색 등전점 측정 ... 129
7.3 아미노산 서열 분석 ... 129
7.3.1 Edman degradation(Phenyl isothiocyanate degradation) ... 130
7.3.2 아미노산 서열분석용 시료준비 ... 132
7.3.2.1 단백질 정제 조건 ... 132
7.3.2.2 정제방법 ... 133
7.3.2.2.1 전기영동 ... 133
7.3.2.2.2 PVDF 막에 electroblotting ... 134
7.3.2.2.3 Electrotransfer ... 134
7.3.2.2.4 Protein detection ... 136
7.3.2.2.4.1 Coomassie Brilliant Blue(CBB) 염색 방법 ... 136
7.3.2.2.4.2 Amido black staining ... 137
7.3.2.2.4.3 Ponceau S staining ... 137
7.3.3 단백질 서열분석기(Protein sequencer) 작동원리 ... 137
7.3.3.1 Coupling ... 138
7.3.3.2 Cleavage ... 138
7.3.3.3 Conversion ... 138
7.3.3.4 Identification ... 139
7.3.3.5 Data analysis ... 139
7.3.4 아미노산 서열 이용 DNA 정보 번역 ... 139
8. 당 및 지질 분리기술 ... 141
8.1 다당류의 분리 및 분석 ... 141
8.1.1 다당체의 추출 및 분리 ... 142
8.1.2 다당류의 분석 ... 143
8.1.2.1 다당체 구성 단당류의 분석 ... 143
8.1.2.2 당류의 정량 ... 143
8.1.2.2.1 Phenol-sulfuric acid assay ... 143
8.1.2.2.2 환원당 정량 ... 143
8.1.2.2.3 Uronic acid : Carbazole assay ... 144
8.1.2.3 TLC에 의한 단당류 분석 ... 144
8.1.2.3.1 TLC plate, 전개용매 및 TLC chamber 준비 ... 144
8.1.2.3.2 TLC ... 145
8.1.2.3.3 발색 ... 145
8.1.2.4 단당류의 trimethylsilyl derivative 합성 및 GLC에 의한 단당류 분석 ... 147
8.1.2.5 다당체의 primary structure 분석 ... 148
8.1.2.5.1 Methylsulphinyl methyl sodium의 준비 ... 149
8.1.2.5.2 다당체의 methylation ... 149
8.1.2.5.3 가수분해 ... 150
8.1.2.5.4 환원반응 ... 151
8.1.2.5.5 Acetylation ... 151
8.2 지질의 분리 및 분석 ... 151
8.2.1 지질의 분리 ... 152
8.2.1.1 Total lipid의 추출 ... 152
8.2.1.2 Silicic acid를 이용한 지질의 분리 ... 152
8.2.2 지방산 조성 분석 ... 152
9. DNA 단편 이용기술 ... 154
9.1 RFLP 분석법 ... 154
9.1.1 벼 DNA 순수분리 ... 155
9.1.2 제한효소 처리에 의한 DNA절단 ... 156
9.1.3 Recombinant plasmid의 대장균에 형질전환 ... 157
9.1.4 형질전환된 bacteria의 대량증식 ... 157
9.1.5 Agarose electrophoresis ... 157
9.1.6 Southern blotting(alkaline procedure) ... 158
9.1.7 DNA 검정법 ... 158
9.1.8 Random primer법에 의한 probed의 <m:math xmlns ... '"htt
9.1.9 DNA hybridization ... 159
9.1.10 Washing filters 및 autoradiography ... 160
9.1.11 RFLP scoring ... 161
9.1.12 연관분석 예 ... 161
9.2 PCR을 이용한 DNA의 다형성 분석 ... 166
9.2.1 중합효소 연쇄 반응(PCR) ... 166
9.2.1.1 PCR의 원리 및 방법 ... 166
9.2.1.1.1 PCR의 일반적인 과정 ... 167
9.2.1.1.2 PCR에 사용되는 여러 조건 ... 167
9.2.1.2 PCR을 이용한 DNA의 다형성 분석 ... 169
9.2.1.2.1 CAPs(Cleavable Amplified Polymorphic DNA) ... 169
9.2.1.2.2 RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA) ... 170
9.2.1.2.3 STS(Sequence Tagged Sites) ... 171
9.2.1.2.4 Microsatellite ... 171
9.2.1.2.5 AFLP(Amplified Fragment Length Polymorphism) ... 172
9.2.1.2.6 IRA(Inter Repeat Amplification) ... 173
Ⅲ. 식물 형질 전환 및 확인 ... 175
1. 식물용 운반체 ... 176
1.1 식물 유전자 운반체의 기능 ... 176
1.2 식물 유전자 운반체의 구비 요건 ... 176
1.3 식물 유전자 운반체의 종류 ... 177
1.3.1 삽입 유전자의 구조 및 형태에 따른 구분 ... 177
1.3.2 복제원에 의한 구분 ... 178
1.3.2.1 Ti plasmid 유래 운반체 ... 178
1.3.2.2 직접형질전환용 운반체 ... 179
1.4 실험 재료 ... 179
1.4.1 기자재 ... 179
1.4.2 배지 및 완충액 조제 ... 180
1.4.3 배지 ... 180
1.4.4 유전자 운반체 ... 180
1.5 실험 방법 ... 181
1.5.1 세균의 경우 ... 181
1.5.2 DNA 상태로 보관 ... 181
1.5.3 입수 자료의 확인 ... 181
1.5.4 재조합 운반체 작성 ... 181
1.6 재조합 운반체의 Agrobacterium 내 도입 ... 182
1.6.1 직접 도입법 ... 182
1.6.1.1 Freeze thawing 법 ... 182
1.6.1.2 전기 충격법(Electroporation) ... 183
1.6.1.3 Triparental mating ... 183
1.6.1.4 Agrobacterium 균주내 운반체의 분리 및 확인 ... 184
1.6.1.4.1 Agrobacterium DNA의 분리 및 확인 ... 184
1.6.1.4.2 Agrobacterium에서 직접 DNA 분리 ... 184
2. 식물 형질전환 방법 ... 185
2.1 생물적 방법(Natural infection agent) ... 186
2.1.1 Agrobacterium 이용 형질전환 ... 186
2.1.2 Virus ... 186
2.2 물리적 방법 ... 187
2.3 실험 방법 ... 187
2.3.1 Agrobacterium 이용 방법 ... 187
2.3.2 전기 충격법 ... 188
2.3.3 유전자 총 ... 190
2.3.4 PEG 처리에 의한 원형질체 형질전환 ... 191
2.3.4.1 원형질체 준비 ... 191
2.3.4.2 PEG 처리 ... 191
2.3.4.3 Feeder layer 준비 ... 191
2.3.4.4 원형질체 치상 및 배양 ... 192
3. 형질전환 선발에 이용되는 표지형질 ... 192
3.1 Neomycine phosphotransferase Ⅱ(NPT Ⅱ) 분석 ... 192
3.2 Chloramphenicol acetyltransferase(CAT) 분석 ... 194
3.3 Agrobacterium T-DNA 유래 유전자 ... 195
3.3.1 Octopine 및 nopaline의 분석 ... 195
3.3.2 Agropine 및 mannopine의 분석 ... 196
3.4 제초제 내성 유전자 ... 197
3.4.1 L-phosphinothricin(PPT) 내성 ... 197
3.4.2 Glyphosate(N-phosphonomethylglycine) 내성 ... 198
3.5 Luciferase 유전자 ... 199
3.6 GUS(β-glucuronidase) 유전자 ... 201
3.6.1 형광분석법(Fluorometric assay) ... 202
3.6.2 조직학적 분석(Histochemical assay) ... 203
4. 유전자 전환 작물의 생물검정 ... 204
4.1 병해충의 생물검정법 ... 204
4.1.1 병의 생물검정 ... 204
4.1.1.1 인공접종의 목적과 고려사항 ... 205
4.1.1.2 병 성립에 영향을 주는 요인 ... 205
4.1.1.3 접종방법 ... 206
4.1.1.3.1 근부접종 ... 207
4.1.1.3.2 줄기의 접종 ... 209
4.1.1.3.3 잎의 접종 ... 209
4.1.1.3.4 세균의 접종방법 ... 210
4.1.1.3.5 바이러스의 접종방법 ... 210
4.1.2 해충의 생물검정 ... 211
4.1.2.1 실내검정법 ... 211
4.1.2.2 폿트실험법 ... 212
4.1.2.3 포장실험법 ... 213
4.2 유전자 전환 작물의 안정성 ... 214
Ⅳ. 조직배양 기술 ... 215
1. 식물체 분화 유도 ... 215
1.1 실험재료 ... 215
1.1.1 Explant ... 215
1.1.2 배양배지 ... 216
1.1.3 실험 준비물 ... 219
1.2 분석방법 ... 219
1.2.1 Explant 준비 ... 219
1.2.2 배지조제 ... 220
1.2.3 캘러스 유기와 현탁배양 ... 221
1.2.4 원형질체 분리 및 배양 ... 222
2. 약배양 ... 223
2.1 실험재료 ... 224
2.1.1 Explant ... 224
2.1.2 시약 ... 224
2.1.2.1 배지 ... 224
2.1.2.2 시약 및 소독액 ... 224
2.1.3 실험기구 ... 224
2.2 실험방법 ... 225
2.2.1 약의 채취 ... 226
2.2.2 전처리 ... 226
2.2.3 배양 ... 226
2.2.3.1 캘러스 유기 ... 226
2.2.3.2 식물체 재생 ... 227
3. 2차 대사산물 생산 ... 231
3.1 세포배양에 의한 2차 대사산물 생산조건 ... 232
3.2 주요 2차 대사산물 ... 233
3.2.1 의약품 및 생리활성 물질 ... 233
3.2.1.1 항종양 물질(Antitumor compound) ... 233
3.2.1.2 Digitoxin과 digoxin ... 234
3.2.1.3 Saponin ... 235
3.2.1.4 Sterol ... 235
3.2.1.5 Ubiquinone-10 ... 236
3.2.1.6 Biotin ... 236
3.2.2 화장품 및 식품 원료 ... 236
3.2.2.1 Shikonin ... 236
3.2.2.2 치클(Chicle) ... 237
3.2.3 색소 ... 237
〈참고문헌〉 ... 239
〈미생물편〉
Ⅰ. 미생물 유전공학 연구의 의의 ... 255
1. 미생물의 전문적 기능을 이용한 산업적 응용 ... 255
2. 미생물 유용유전자의 분리 및 활용 ... 257
2.1 Plasmid vector를 이용한 방법 ... 257
2.2 Chromosome integration에 의한 새로운 균주 개발 ... 257
2.3 새로운 잡종대사산물 창출 ... 257
2.4 새로운 인공효소 개발(단백질 공학) ... 258
Ⅱ. 돌연변이 유기 및 이용
1. 물리화학적인 돌연변이 유기 ... 261
1.1 자외선 조사에 의한 돌연변이(Ultra-violet light mutagenesis) ... 261
1.1.1 생존곡선(Survival curve) ... 261
1.1.2 자외선 조사에 의한 돌연변이법 ... 262
1.2 Nitrosoguanidine mutagenesis ... 262
1.2.1 MNNG 돌연변이에 의한 생존곡선 작성방법 ... 264
1.2.2 MNNG 돌연변이 ... 264
2. Transposon 이용 및 유전자 분리 ... 266
2.1 Transposable element(전위인자)의 종류 ... 266
2.1.1 IS인자(Insertion Sequence) ... 266
2.1.2 Tn(Transposon) ... 267
2.1.3 람다파지(λ phage) ... 269
2.1.4 뮤 파지(Mu phage) ... 269
2.1.5 Retrovirus ... 270
2.1.6 Suicide vector ... 270
2.2 Transposition(전위) 방법 ... 271
2.2.1 Bacterial mating에 의한 방법 ... 271
2.2.2 Transduction에 의한 방법 ... 272
2.2.2.1 파지(Phage) 대량분리 ... 272
2.2.2.2 Phage:Tn의 전위방법 ... 273
2.2.3 Tn 삽입확인 및 cloning ... 273
2.2.3.1 Pulsed-field electrophoresis에 의한 확인 ... 273
2.2.3.2 영양요구성 균주 선발 및 극성효과 검정 ... 274
2.2.3.3 Tn 삽입부위 확인 및 관련유전자 cloning ... 275
2.2.3.4 Colony hybridization ... 276
3. 위치 특이적 돌연변이(Site-directed mutagenesis) ... 277
3.1 Kunkel법에 의한 위치특이적 돌연변이 ... 278
3.2 Altered Sites™ system을 이용한 위치 특이적 돌연변이 ... 278
3.2.1 일반적 고려사항 ... 280
3.2.2 Oligonucleotide의 인산화 ... 280
3.3 돌연변이 반응 ... 282
3.4 돌연변이주의 분리와 선발 ... 283
3.4.1 pSELECT plasmid mini-prep procedures ... 283
3.4.2 JM109로 2차 형질전환 ... 284
3.4.3 형질전환주의 분석 ... 284
Ⅲ. 미생물의 유전자 조작 및 형질전환 ... 286
1. 유용유전자 분리 ... 286
1.1 미생물 DNA의 일반적인 분리법 ... 286
1.2 DNA의 분리 ... 286
1.2.1 염색체 DNA의 분리 ... 286
1.2.1.1 미생물 염색체 DNA 분리 방법 Ⅰ ... 287
1.2.1.2 미생물 염색체 DNA 분리 방법 Ⅱ ... 287
1.2.2 Plasmid DNA의 분리 ... 288
1.2.2.1 소량의 플라스미드 DNA 분리 ... 289
1.2.2.1.1 Alkali 방법 ... 289
1.2.2.1.2 Boiling 방법 ... 290
1.2.2.2 대량의 플라스미드 DNA 분리 ... 290
1.3 전기영동에 의한 DNA의 분리 확인 ... 292
1.4 DNA의 간이 정량법 ... 292
2. 미생물의 형질전환 ... 293
2.1 대장균 형질전환 ... 293
2.1.1 CaCl₂ 이용법 ... 293
2.1.2 대장균에 형질전환 ... 294
2.1.3 Electrophoration ... 295
2.2 효모 형질전환 ... 296
2.2.1 원형질체 이용법 ... 296
2.2.2 Lithium acetate 법 ... 298
2.2.2.1 단일 나선 운반용 DNA 준비 ... 299
2.2.2.2 Salmon sperm 운반용 DNA 준비 ... 300
2.2.2.3 Electorphoration ... 301
3. 원형질체 융합 및 세포기관의 전이 ... 302
3.1 원형질체 분리 ... 302
3.1.1 셀로판지(Cellophan sheet)배양 분리법 ... 303
3.1.2 액체배양 분리법 ... 303
3.1.3 포자 이용 분리법 ... 303
3.1.4 자발적 분리법(세포벽 합성 저지법) ... 304
3.1.5 항생제에 의한 분리법 ... 304
3.1.6 자가분해법 ... 304
3.2 원형질체 재생 ... 306
3.2.1 반고체 배지상의 배양 ... 307
3.2.2 액체 배지상의 배양 ... 307
3.3 원형질체 융합 ... 308
3.3.1 화학물질 융합법(수용성 중합체 융합법) ... 309
3.3.2 전기 융합법 ... 309
3.3.3 Laser 융합법 ... 310
3.3.4 바이러스 유도 융합법 ... 310
3.4 원형질체내 세포기관의 전이 ... 313
3.4.1 핵(Nucleus)의 전이 ... 313
3.4.2 미토콘드리아(Mitochondria)의 전이 ... 313
3.4.3 염색체(Chromosome)의 전이 ... 314
Ⅳ. 분자생물학적 방법에 의한 미생물 분류 ... 316
1. DNA base composition ... 317
2. DNA-DNA hybridization ... 318
3. Restriction Fragment Length Polymorphism(RFLP) ... 319
4. Ribosomal RNA genes(rDNA)의 분석 ... 320
4.1 원핵미생물의 genomic DNA의 분리 ... 321
4.2 진핵미생물의 genomic DNA의 분리 ... 322
4.3 PCR에 의한 ribosomal RNA gene의 증폭 ... 322
4.4 PCR산물의 ligation ... 326
4.5 E. coli cell내로 vector의 형질전환 ... 328
4.6 Vector의 분리 ... 329
4.7 Sequencing ... 330
〈참고문헌〉 ... 335
〈축산편〉
Ⅰ. 축산에서의 유전자 조작 ... 341
Ⅱ. 체외수정 및 수정란 보존 ... 344
1. 난포란의 채취 및 성숙배양 ... 345
1.1 난소의 채취전 준비 ... 345
1.2 도축장에서 ... 346
1.3 난자의 흡인 및 찾기 ... 346
1.3.1 난자 흡인 방법 ... 347
1.3.2 난자 찾기 ... 347
1.4 난자의 체외성숙 ... 348
1.4.1 준비물 ... 348
1.4.1.1 배양액 ... 348
1.4.1.2 배양소적(Drop) 만들기 ... 349
1.4.2 미성숙 난자의 질 평가 분류 ... 349
1.4.2.1 형태적 질의 평가 ... 349
1.4.2.2 난자의 성숙 배양 ... 350
2. 정자의 수정능획득 및 수정 ... 351
2.1 정자의 준비 ... 351
2.2 수정 ... 351
2.3 BO액의 제조법 ... 352
3. 체외수정란의 배발생 ... 353
3.1 수정란의 배양 ... 353
3.2 수정란의 발육검사 ... 354
3.3 초기발달의 검사 ... 354
3.4 배반포 수정란의 검사 ... 355
3.5 CRl aa액의 제조법 ... 355
4. 수정란의 동결보존 ... 356
4.1 수정란?
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