목차 일부
머리말
약어 표시
제1장 효모의 유전
1-1 생활환 ... 1
1-2 배수체와 이수체 ... 3
1-2-1 배수체 ... 3
1-2-2 이수체 ... 3
1-3 유전형질 ... 5
1-4 핵 유전자의 재조합 ... 7
1-5 핵의 유전자 지도 ... 9
1-6 Mitochondria의 DNA와 단백질 합성 ... 10
1-7 mt DNA...
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목차 전체
머리말
약어 표시
제1장 효모의 유전
1-1 생활환 ... 1
1-2 배수체와 이수체 ... 3
1-2-1 배수체 ... 3
1-2-2 이수체 ... 3
1-3 유전형질 ... 5
1-4 핵 유전자의 재조합 ... 7
1-5 핵의 유전자 지도 ... 9
1-6 Mitochondria의 DNA와 단백질 합성 ... 10
1-7 mt DNA의 변이에 의한 호흡결손 ... 12
1-7-1. ρ변이 호흡결손 ... 12
1-7-2 mit변이 호흡결손 ... 16
1-8 mit DNA의 변이에 의한 약제 내성 ... 17
1-8-1 mitochondra유전자의 재조합 ... 17
1-8-2 극성 현상 ... 18
1-9 소형 환상 DNA와 약제 내성 ... 20
1-10 2중쇄 RNA(dsRNA)에 의한 유전 ... 21
1-11 새로운 효모의 유전 ... 22
제2장 효모의 접합형과 transposable genetlc element
2-1 Homothallism과 Heterothallism ... 25
2-2 접합형의 변환과 control element, cassette model ... 26
2-3 Homothallism유전자 ... 28
2-3-1 발견의 역사 ... 29
2-3-2 Homothallism과 접합형 변환 ... 31
2-3-3 Homothallism 유전자의 mapping ... 35
2-3-4 유전자의 명명법의 개정 ... 35
2-4 모델의 검증 ... 35
2-4-1 접합형 유전자좌 돌연변이의 접합형 변환에 의한 수복 ... 36
2-4-2. 돌연변이형의 HMRa 또는 HMRα에 의한 접합형 유전자의 돌연변이형으로 변환
2-4-3 염색체 이상에 의한 접합형 변환 돌연변이 ... 37
2-4-4 HML 및 HMR 유전자의 발현을 허용하는 돌연변이 ... 37
2-4-5 Cloning된 HMLa와 MATα유전자 ... 38
2-5. Cassette 교란의 기구 ... 39
제3장 효모의 killer인자와 육종
3-1 Killer효모의 종류 ... 43
3-2 Killer독소와 치사작용 ... 45
3-3 Killer현상의 유전 ... 46
3-4 Killer plasmid ... 48
3-5 Killer 효모의 육종 ... 49
3-5-1 Back cross법 ... 50
3-5-2 세포질 도입법 ... 52
제4장 효모의 세포융합과 이용
4-1 연구의 배경 ... 56
4-2 세포융합 기술 ... 57
4-2-1 Protoplast의 조제 ... 58
4-2-2 융합 ... 59
4-2-3 재생 ... 59
4-3 융합체의 해석 ... 60
4-4 세포융합의 성과와 응용 ... 60
4-4-1 무성적인 잡종조성 ... 61
4-4-2 배수체와 이수체 ... 61
4-4-3 부분적인 잡종형성 ... 61
4-4-4 Mitochondria 유전자의 재조합 ... 62
4-4-5 Plasmid의 속간 도입 ... 62
4-4-6 유전해석에의 응용 ... 63
4-5 Organella의 도입 ... 63
4-5-1 Mitochondria의 도입 ... 63
4-5-2 핵의 도입 ... 65
제5장 효모의 새로운 형질전환법
5-1 알칼리 금속을 사용한 효모의 형질전환법 - KU법 ... 67
5-1-1 KU법의 표준적인 실험 조작 ... 67
5-1-2 KU법에 있어서 각종 요인 ... 68
1 각종 금속 이온의 효과 ... 68
2. 각종 알칼리 금속에 대한 최적 농도 ... 69
3. 집균시의 최적 균농도 ... 69
4. Plasmid DNA의 농도 ... 69
5. PEG의 종류와 최적농도 ... 69
6. Linear Plasmid DNA의 incorporation ... 69
5-1-3 보존 균체에 의한 형질전환 ... 70
5-1-4 각종 plasmid의 incorporation ... 70
5-1-5 알칼리 금속 이외의 물질 처리에 의한 형질전환 ... 71
5-1-6 KU법에 있어서 DNA의 incorporation기구 ... 71
5-2 Protoplast법과 KU법의 비교 ... 73
5-3 KU법의 개량 ... 74
5-3-1 KUR법 ... 74
5-4 KU법에 의한 유용 효모의 육종 ... 75
5-4-1 해당계 유전자의 cloning ... 75
5-4-2 육종 균주의 실용 예 ... 76
1 ATP생산 ... 76
2 Ethanol생산 ... 76
3 해당계 유전자에 의한 유용 효모 육종의 금후의 문제점 ... 76
제6장 효모 세포질 인자의 도입 기술
6-1 육종기술로서의 cytoduction ... 79
6-2 Cytoduction기술 ... 79
6-2-1 접합에 의한 cytoduction ... 79
6-2-2 우발접합에 의한 cytoduction ... 81
6-2-3 Protoplast융합에 의한 cytoduction ... 82
6-2-4 Mini protoplast융합에 의한 cytoduction ... 82
6-2-5 UV치사 protoplast융합에 의한 cytoduction ... 83
6-3 Cytoduction 기술에 의한 분자 육종 개량 ... 83
6-3-1 접합 - Cytoduction법에 의한 killer균주의 육종 ... 84
6-3-2 UV치사 protoplast융합 - Cytoduction법에 의한 killer균주의 육종 ... 85
6-3-3 protoplast 융합 - Cytoduction법에 의한 killer 균주의 육종 ... 87
6-4 육종 균주의 발효공업에 이용 ... 88
6-4-1 KL-7 균주에 의한 청주양조 ... 88
6-4-2 Killer화 균주 K₂-M-111에 의한 연속 ethanol 발효 ... 89
제7장 효모의 형질전환 부수 세포융합법
7-1 형질전환 부수 세포융합법의 개요 ... 92
7-2 형질전환 부수 세포융합 빈도의 측정 ... 93
7-2-1 혼합 형질전환법 ... 93
7-2-2 sir - 돌연변이 균주를 사용하는 방법 ... 95
7-3 형질전환 부수 세포질 혼합 ... 95
7-4 형질전환 부수 세포융합법으로 동일유전 배경의 배수체 균주의 육종 ... 97
7-5 형질전환 부수 세포융합법으로 실용 효모의 교잡 ... 99
7-5-1 실용 균주의 형질전환체 취득에 유효한 plasmid선택 부호 ... 99
7-5-2 G418 내성 형질전환체 취득 조건의 검토 ... 100
7-5-3 G418 내성 선택에 의한 형질전환 부수 세포융합 ... 102
7-5-4 Methotrezate - sulfaniamide내성 plasmid에 의한 형질전환 부수 세포융합 ... 103
제8장 전장효과에 의한 식물과 식물과 효모세포에 유전자의 도입
8-1 Electroinjection장치 ... 106
8-2 효모 세포의 형질전환 ... 107
8-3 담배 엽육세포의 transfection ... 110
8-4 Electroinjection의 기구 ... 112
제9장 분열효모에 있어서 염색체 공합
9-1 Clone화 DNA의 염색체에 integration ... 114
9-2 α-Tublin 유전자의 파괴 ... 116
9-3 α-Tublin 유전자의 발현 ... 119
9-4 동원체 DNA의 cloning ... 119
9-5 mini 염색체의 작제 ... 122
9-6 염색체의 시각화 ... 125
제10장 효모 2μmDNA에 유사한 plasmid
10-1 2μmDAN ... 127
10-1-1 구조 ... 128
10-1-2 ARS영역 ... 128
10-1-3 Code되고 있는 단백질의 기능 ... 128
10-1-4 분자내 재조합 ... 129
10-2 pSR plasmid ... 129
10-2-1 구조 ... 129
10-2-2 ARS영역 ... 132
10-2-3 P,S,R영역의 기능 ... 133
10-2-4 분자내 재조합을 행하는 장소 ... 135
10-2-5 2μm DNA 단백질과의 호환성 ... 136
10-3 pSB plasmid ... 136
10-3-1 구조 ... 137
10-3-2 ARS영역 ... 138
10-3-3 분자내 재조합 ... 139
10-4 IR와 ARS ... 139
제11장 Kluyveromyces lactis killer plasmid의 구조와 기능
11-1 선상 pGKL plasmid의 말단구조 ... 140
11-1-1 복제의 문제 ... 140
11-1-2 pGKL말단 구조의 해석 ... 142
1. 말단수식 ... 142
2. IR구조 ... 144
11-2 Killer 유전자의 해석 ... 146
11-2-1 Killer 유전자의 cloning ... 146
11-2-2 pGKL1의 ORF ... 146
11-2-3 Killer 유전자의 동정 ... 146
11-2-4 P₃-ORF에 code된 단백질 ... 147
1 Killer 단백질의 구성 ... 147
2 P₃단백질의 아미노산 배열 ... 147
11-3 pGKL의 ARS ... 149
11-3-1 Saccharomyces cerevisiae에서 기능하는 ARS ... 149
11-3-2 이종효모에서 작용하는 ARS ... 150
11-3-3 형질전환체의 안정성 ... 150
제12장 효모의 선상killer plasmid의 구조와 기능
12-1 pGKL plasmid의 5'말단의 단백질 ... 152
12-2 pGKL1에서 유래된 plasmid F2와 hair pin plasmid ... 155
12-3 pGKL1의 유전자 구성 ... 158
12-3-1 Killer 독소 유전자 ... 158
12-3-2 Killer 내성 유전자 ... 158
12-4 새로운 선상 plasmid ... 160
제13장 RNA plasmid에 의존하지 않는 효모의 killer현상
13-1 새로운 타입의 killer 효모의 분리와 성질 ... 163
13-2 RAN plasmid에 의존하지 않는 killer(week killer)효모의 분포와 성질 ... 165
13-3 Weak killer를 지배하는 2개의 핵 유전자의 mapping ... 166
제14장 Hansenula mrakii가 생산하는 killer toxin의 구조와 항균활성 및 작용기구
14-1 Killer toxin의 정제와 단백질 구조 ... 169
14-1-1 Killer toxin의 조제 ... 169
14-1-2 HM-1의 성질과 구조 ... 171
14-2 HM-1의 활성의 강도와 항균영역 ... 172
14-3 HM-1의 작용 기구 ... 174
14-3-1 증식세포의 고분자 합성계에 대한 HM-1의 영향 ... 175
14-3-2 Protoplast의 고분자 합성계에 대한 HM-1의 영향 ... 175
14-3-3 HM-1의 세포벽 다당에 미치는 영향 ... 176
14-4-4 무세포계에 있어서β(1→3)glucan합성에 대한 HM-1의 영향 ... 177
제15장 효모의 염색체 복제 개시점(ARS)의 기능적 최소 필수영역
15-1 DNA복제에 관여하는 유전자 ... 179
15-2 DNA 복제에 관여하는 효소 ... 180
15-3 DNA복제 복합체 ... 181
15-4 자율 복제개시점 ... 182
15-4-1 염색체의 복제개시점(ARS) ... 182
15-4-2 염색체에서분리된 ARS ... 182
15-4-3 염색체의 복제개시점인 ARS영역 ... 183
15-5 ARS의 기능적 최소 필수영역 ... 184
15-5-1 ARS1 ... 184
15-5-2 ARS2 ... 187
15-5-3 기타의 ARS ... 188
15-6 효모내에서 ARS기능을 나타내는 이종생물의 DNA단편 ... 188
15-7 ARS의 공통구조 ... 189
제16장 분열효모의 ars와 vector기능
16-1 분열효모의 형질전환 ... 192
16-1-1 Saccharomyces cerevisiae계 vector에 의한 고빈도 형질전환 ... 192
16-1-2 Schizosaccharomyces pombe염색체 유래 ars을 가진 vector ... 193
1 pFYM plasmid ... 193
2 pFL20 pPM2 ... 194
3 ars의 출현빈도 ... 194
16-2 분열효모에 있어서 vector plasmid의 거동 ... 195
16-2-1 중합 ... 195
16-2-2 공중합 ... 196
16-2-3 재편성 ... 198
16-2-4 Plasmid안정화의 조건 ... 199
16-3 ars의 미세 구조 ... 200
16-3-1 ars1의 염기배열 ... 200
16-3-2 Saccharomyces cerevisiae의 ars와의 비교 ... 200
제17장 효모 2본쇄 RNA 복제의 유전적 제어
17-1 효모에 있어서 2본쇄 RNA의 종족 ... 202
17-2 2본쇄 RNA복제에 영향하는 염색체 유전자 ... 205
17-3 2본쇄 RNA복제의 효소학-비루스와 같은 입자 복제경로 ... 206
17-4 2본쇄 RNA복제과정에서의 염색체 유전자의 역할 ... 210
17-5 2본쇄 RNA복제에 영향을 주는 새로운 세포질 유전자 ... 211
17-6 2본쇄 RNA복제에 영향을 주는 염색체 유전자의 clone화 ... 211
17-6-1 MAK11 및 CDC16 ... 212
17-6-2 MAK18의 clone화 ... 213
17-6-3 MKT1 ... 213
17-6-4 SKI3과 SKI8 ... 213
제18장 효모Phosphatase계에 있어서 신호전달과 유전자 발현 조절기구
18-1 유전자 발현 조절 모델 ... 214
18-1-1 Phosphatase유전자 ... 214
18-1-2 유전학적 발현 조절 모델 ... 216
18-2 모델의 분자생물학적 검증과 개정 ... 217
18-2-1 PHO9 유전자 산물은 rALPase생산에 있어서 전사 수준 이후에서 기능한다 ... 217
18-2-2 PHO2와 PHO4유전자는 낮은 수준으로 구성적 발현을 한다 ... 217
18-2-3 조절 유전자 PHO81의 전사는 Pi와 PHO 조절 유전자계에 제어된다 ... 220
제19장 효모의 산성 phosphatase 유전자 조절영역의 해석과 B형 간염비루스 성분의 생산
19-1 PHO 발전계를 사용한 효모 발현 vector ... 223
19-2 B형 간염비루스의 genome ... 226
19-3 효모에 의한 HBV 단백질의 생산 ... 228
19-4 효모에 의한 기타 이종 유전자의 발현 ... 229
제20장 Saccharomyces diastaticus의 glucoamylase 유전자의 cloning과 구조 및 발현
20-1 도입하려는 효소의 기원과 선택 ... 231
20-2 숙주의 육성과 vector의 작제 ... 232
20-2-1 Saccharomyces cerevisiae에 있어서 glucoamylase 발현조절 유전자 ... 232
20-2-2 숙주 효모와 vector의 조제 ... 233
20-3 Saccharomyces diastaticus(STA1)의 glucoamylase 유전자 STA1의 cloning ... 234
20-4 STA1 또는 STA3을 함유하는 plasmid의 조제 및 제한효소지도 ... 235
20-5 Glucoamylase분비생산 유전자(STA1)를 함유하는 DNA의 염기배열 ... 236
20-6 pST1의 발현과 안정성 ... 238
20-7 Glucoamylase 정제와 subunit 구조 ... 239
20-8 STA1과 STA3의 상동성 ... 241
20-8-1 Soutern 해석 ... 241
20-8-2 면역침전에 의한 해석 ... 242
20-9 Saccharomyces cerevisiae의 유전자 STA ... 242
제21장 효모발현용 Vector의 개발
21-1 TRP1 유전자 promoter에 의한 αNE의 생산 ... 246
21-2 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAP-DH)유전자에 의한 αNE의 생산
246
21-3 3-Phosphoglycerate kinase(PGK)유전자에 의한αNE의 생산 ... 250
21-4 억제성 산성 phosphatase 유전자(PHO5)에 의한 αNE의 생산 ... 252
제22장 효모 GAL7 유전자 제어영역의 개변에 의한 조절 signal의 해석
22-1 Galactose 대사계 유전자의 발현조절 ... 259
22-2 GAL7 유전자와 galactose계 조절유전자 산물과의 관계 ... 260
22-2-1 융합 단백질을 생산하는 GAL7 promoter를 사용한 발현 vector의 구축 ... 261
22-2-2 GAL7 유전자 제어영역의 일부 결실 유전자의 작제 ... 262
22-2-3 GAL4, GAL80을 결실한 숙주 효모의 작제 ... 263
22-2-4 GAL7유전자 제어영역 개변 유전자의 발현 ... 264
22-2-5 GAL7 유전자 상류 조절배열 ... 267
22-3 GAL4 유전자 산물에 의하여 발현이 촉진되는 기타 유전자 ... 267
제23장 Saccharomyces diastaticus의 융합에 의한 전분연속 발효균주의 육종
23-1 효모의 세포융합의 방법 ... 270
23-1-1 Protoplast의 조제 ... 270
23-1-2 Protoplast의 융합 ... 271
23-1-3 융합 Protoplast를 정상 세포로 재생 ... 273
23-2 세포융합에 의한 Sacch. diastaticus의 전분 발효능의 개량 ... 274
23-2-1 서로 다른 STA 유전자를 가진 일배체 세포의 융합 ... 274
23-2-2 이배체 세포(a / α)의 세포융합에 의한 사배체 세포의 조성 ... 276
23-2-3 Sacch. diastaticus와 이속 효모와의 융합 ... 277
제24장 Rhizopus glucoamylase 유전자의 효모에 있어서 발현과 응용
24-1 Glucoamylase 유전자의 구조 ... 281
24-2 효모에서 glucoamylase 유전자의 발현 ... 282
24-3 Glucoamylase 단백질의 구조 ... 282
24-4 실용 효모에의 도입 ... 282
24-5 알콜 생산실험 ... 286
제25장 효모에 있어서 유전자 재조합에 의한 물질생산
25-1 복제개시점 ... 289
25-1-1 2μm DNA vector ... 290
25-1-2 염색체 ARS의 vector ... 291
25-1-3 Centtomere vector ... 292
25-1-4 Mitochondria ARS의 vector ... 292
25-1-5 기타 자율증식 vector ... 292
25-1-6 ARS를 함유하지 않는 vector ... 292
25-2 전사 조절 부위 ... 294
25-3 효모에서 단백질의 분비 ... 294
25-3-1 효모의 분비 단백질 ... 294
25-3-2 분비 변이균주와 분비 수송 경로 ... 296
25-3-3 당 사슬의 도입과 단백질의 분비 ... 297
25-3-4 분비 단백질의 생성과 signal peptide ... 298
25-3-5 효모에 있어서 이종 단백질의 분비 ... 300
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