목차 일부
머리말 ... 3
제Ⅰ부 생화학 실험의 기본원리
제1장 서론
실험에 관한 일반 주의사항 ... 27
실험실 사고에 대한 조치 ... 28
부피측정용 유리기구 ... 30
농도 및 묽히기 ... 32
실험오차의 취급 ... 34
실험보고서 작성 ... 36
제2장 pH와 완충용액
이론 ... 39
pH측정 ... 46
실...
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목차 전체
머리말 ... 3
제Ⅰ부 생화학 실험의 기본원리
제1장 서론
실험에 관한 일반 주의사항 ... 27
실험실 사고에 대한 조치 ... 28
부피측정용 유리기구 ... 30
농도 및 묽히기 ... 32
실험오차의 취급 ... 34
실험보고서 작성 ... 36
제2장 pH와 완충용액
이론 ... 39
pH측정 ... 46
실험례 ... 50
제3장 분광법
이론 ... 53
분광광도법 ... 53
실험례 ... 62
형광분석법 ... 64
실험례 ... 71
제4장 크로마토그래피
이론 ... 73
흡착 크로마토그래피 ... 73
실험례 ... 75
분배 크로마토그래피 ... 76
종이 크로마토그래피 ... 77
실험례 ... 81
얇은 막 크로마토그래피 ... 82
실험례 ... 84
이온교환 크로마토그래피 ... 84
실험례 ... 87
겔 거르기 크로마토그래피 ... 89
실험례 ... 90
친화 크로마토그래피 ... 91
실험례 ... 92
제5장 전기이동법
이론 ... 95
전기이동법의 종류 ... 97
실험 5-1 종이 전기이동법 ... 104
실험 5-2 SDS 겔 전기이동법 ... 106
제6장 원심분리법
이론 ... 111
원심분리기의 응용 ... 113
실험례 : 기울기 원심분리법에 의한 쥐 간 세포성분의 분리 확인 ... 119
제7장 방사성 동위원소 사용법
이론 ... 123
G-M 계측기에 의한 β-선 계측효율의 비교 ... 139
액체섬광 계측기에 의한 이중표지 화합물의 측정 ... 139
방사성 동위원소 취급수칙 ... 142
제8장 세포배양법
이론 ... 145
미생물의 순수분리 및 배양 ... 149
실험 8-1 도말평판법 ... 152
실험 8-2 주입평판법 ... 154
실험 8-3 선택배지상에서의 미생물의 성장 ... 155
동물세포배양 ... 155
실험 8-4 세포수 측정 ... 156
실험 8-5 세포의 복원과 동결 ... 157
식물세포배양 ... 158
제Ⅱ부 생체 분자
제1편 단백질
개요 ... 171
아미노산의 이온적 성질 ... 171
아미노산의 확인 및 정량 ... 173
단백질의 변성 ... 173
단백질의 정제 ... 175
단백질의 정량 ... 176
효소작용의 반응 속도론적 분석 ... 178
효소 활동성에 미치는 요인들 ... 179
정제과정에 있어서의 효소 분석법 ... 183
제9장 아미노산의 적정
실험 9-1 아미노산의 적정 ... 185
제10장 단백질의 특성
실험 10-1 Trichloroacetic acid(TCA)에 의한 침전 ... 191
실험 10-2 아세톤 침전 ... 192
실험 10-3 항원-항체 침전 ... 192
실험 10-4 황산암모늄 침전 ... 194
실험 10-5 Polyethylene glycol(PEG) 침전 ... 195
실험 10-6 한외여과 ... 195
실험 10-7 투석 ... 196
제11장 아미노산과 단백질의 정성·정량분석
실험 11-1 닌히드린 시험 ... 197
실험 11-2 Kjeldahl법에 의한 단백질의 정량 ... 198
실험 11-3 비우렛 반응에 의한 단백질의 정량 ... 200
실험 11-4 Lowry법에 의한 단백질의 정량 ... 201
실험 11-5 자외선 분광광도법에 의한 단백질의 정량 ... 203
실험 11-6 Bradford법에 의한 단백질 정량 ... 205
제12장 단백질의 추출 및 정제
실험 12-1 계란 흰자위 리소짐의 분리 및 정제 ... 207
실험 12-2 맥아의 산성 탈인산가수분해효소의 분리 및 정제 ... 210
제13장 단백질의 구조
실험 13-1 디펩티드의 아미노산 서열 결정 ... 217
실험 13-2 트립토판과 다른 형광단 간의 형광에너지 전달 측정 ... 220
실험 13-3 리소짐과 결정화 ... 223
제14장 효소의 성질
실험 14-1 산성 탈인산가수분해효소의 최적 pH ... 229
실험 14-2 산성 탈인산가수분해효소의 최적 온도 ... 231
실험 14-3 RNA 가수분해효소의 활성도 ... 232
제15장 효소의 반응속도론
실험 15-1 니트로페놀 형성의 표준곡선 결정 ... 236
실험 15-2 V_m_a_x와 K_M값의 결정 ... 236
실험 15-3 무기인산염에 대한 K_i값의 결정 ... 237
제2편 탄수화물
개요 ... 241
제16장 탄수화물 분석 Ⅰ
실험 16-1 페놀-황산 방법을 이용한 총 탄수화물 내용물의 측정법 ... 249
실험 16-2 네오쿠프로인 시험에 의한 환원당 농도의 측정 ... 252
실험 16-3 글루코오스 산화효소를 이용한 D-글루코오스의 정량 ... 256
제17장 탄수화물 분석 Ⅱ
실험 17-1 이당류 조성물의 정량 ... 261
실험 17-2 카르바졸을 이용한 산성당의 측정 ... 263
실험 17-3 박층 크로마토그래피를 이용한 탄수화물의 분석 ... 265
실험 17-4 다당류 분석의 일반적 방법 ... 268
제3편 지질 및 생체막
개요 ... 275
지방질의 분리와 분석 ... 275
생체막 ... 278
제18장 생체막 지방질 분석
1. 유지의 분석
실험 18-1 유지의 알칼리 가수분해(비누화) ... 285
실험 18-2 가수분해물(글리세롤)의 검출 ... 286
실험 18-3 유지의 불포화성 시험 ... 287
실험 18-4 유지의 산값 ... 287
실험 18-5 유지의 비누화값 ... 288
실험 18-6 유지의 요오드값 ... 289
2. 막 지방질의 분석
실험 18-7 적혈구막의 제조 ... 291
실험 18-8 막지방질의 분석-막지방질 추출 ... 292
실험 18-9 막으로부터의 인산 지방질들의 분리 ... 292
실험 18-10 막으로부터의 콜레스테롤의 분석 ... 293
3. Glycosphingolipid 추출 및 확인
실험 18-11 소뇌조직에서의 갱글리오시드 추출 ... 295
실험 18-12 소뇌에서 추출한 갱글리오시드 분석(HPTLC법) ... 296
실험 18-13 당지질의 당 확인법 ... 297
제19장 생체막 내 포스파티딜콜린의 분포 및 콜레스테롤의 생합성 분석
실험 19-1 계란 노른자위의 극성 지방질의 추출 ... 299
실험 19-2 알루미나 컬럼 크로마토그래피에 의한 포스파티딜콜린의 분리 ... 300
실험 19-3 동물 배양세포 내 콜레스테롤 생합성 분석 ... 301
실험 19-4 동물 간 조직 내 콜레스테롤 생합성 분석 ... 303
제20장 식물색소의 분리
실험 20-1 식물색소의 분리 ... 309
제4편 핵산
개요 ... 313
제21장 염색체 DNA의 정제 및 분석
실험 21-1 박테리아 염색체 DNA의 분리 ... 319
실험 21-2 혈액이나 배양된 진핵세포로부터의 염색체 DNA 분리 ... 322
실험 21-3 자외선 흡광도에 의한 DNA 농도 측정 ... 323
실험 21-4 전기이동에 의한 DNA 농도 측정 ... 324
실험 21-5 디페닐아민 분석법에 의한 DNA 정량 ... 325
실험 21-6 DNA의 염기조성 ... 326
제22장 유전자 조작에 의한 유전형질전환
실험 22-1 형질전환 ... 329
실험 22-2 플라스미드 DNA의 분리 ... 331
실험 22-3 플라스미드 DNA의 제한효소 절단 ... 334
실험 22-4 유전자 조작 ... 336
실험 22-5 DNA 연쇄중합반응 ... 342
제23장 RNA의 정제 및 분석
실험 23-1 박테리아에서 RNA의 분리 ... 345
실험 23-2 동물세포로부터 RNA의 분리 ... 349
실험 23-3 Poly(A)^+ RNA의 분리 ... 350
실험 23-4 자외선 흡광도에 의한 RNA 정량 ... 352
실험 23-5 Formaldehyde 아가로오스 겔 전기이동 및 Northern blot 분석 ... 353
실험 23-6 RNA의 변형염기 분석 ... 357
제Ⅲ부 생체 반응
제1편 대사
개요 ... 369
제24장 발효 및 호흡
실험 24-1 효모에 의한 대사 산물로서의 CO₂와 에탄올에 의한 대사 억제 ... 375
제25장 시트르산 회로
실험 25-1 시트르산 합성효소의 반응속도론적 성질 ... 381
제26장 단백질 생합성
실험 26-1 생체 내 단백질 생합성 ... 385
실험 26-2 시험관 내 단백질 생합성 ... 387
제27장 광합성
실험 27-1 엽록체에서의 광인산화 ... 391
제28장 Lac 오페론 유전자의 발현
실험 28-1 β-갈락토시드 가수분해효소의 발현조절 ... 399
제2편 면역
개요 ... 405
제29장 항원·항체 반응
1. 다클론 항체의 생산
실험 29-1 항원의 면역화와 항체 생성의 확인 ... 408
2. 단일클론 항체의 생산
실험 29-2 세포융합 ... 409
3. ELISA
실험 29-3 ELISA를 이용한 난알부민의 정량 ... 411
4. RIA
실험 29-4 RIA를 이용한 corticosteroid의 정량 ... 413
5. 면역침강법
실험 29-5 인체 면역 세포로부터 IgM의 면역침강 실험 ... 416
실험 29-6 동위원소[^3^5S]로 표지된 Jurkat 세포에서 IL-2 수용체의 면역침강법 ... 418
6. Immunoblotting(Western Blot)
실험 29-7 박테리아에서 발현된 재조합 사람 IL-4 단백질의 검출 ... 421
제30장 면역세포의 배양
1. 림프구의 분리
실험 30-1 인체 말초혈액에서 T 세포의 분리 ... 425
2. 림프구의 배양
실험 30-2 인체 말초혈액 T 세포와 B 세포의 배양 ... 428
제31장 면역세포의 분석
1. 사이토카인의 분석
실험 31-1 PHA로 자극한 T 세포 배양액 내의 IL-2 분석 ... 432
2. 면역활성세포능의 분석
2-1. ELISPOT 분석
실험 31-2 항 난알부민 항체를 분비하는 세포의 분석 ... 434
2-2. 세포독성 T 세포의 활성 분석
실험 31-3 암세포 살상 CTL의 활성측정 ... 437
2-3. 림프구의 혼합배양 반응
실험 31-4 HLA항원 allotype을 이용한 면역세포 증식반응 ... 440
3. Immunofluorescence : Flow cytometry 및 형광현미경을 이용한 혈액 내 CD4^+ 및
CD8^+T 세포의 분석 ... 442
실험 31-5 혈액 내의 CD4^+ 및 CD8^+ T 세포의 분석 ... 442
제3편 신경
개요 ... 449
제32장 신경계에 존재하는 수용체의 분석
실험 32-1 아편 유사약물(opioid) 수용체의 포화실험 ... 458
제33장 신경세포 내의 화학물질 분석
실험 33-1 세포 내 칼슘이온 농도의 측정 ... 465
실험 33-2 세포 내 나트륨이온 농도의 측정 ... 468
실험 33-3 세포 내 순환일인산아데노신(cAMP)의 측정 방법 ... 470
실험 33-4 세포 내 총 이노시톨인산염의 측정 ... 473
실험 33-5 세포 내 이노시톨 삼인산염(IP₃) 농도의 측정 ... 475
실험 33-6 세포 내 아라키돈산 농도의 측정 ... 477
실험 33-7 세포 내 다이아실글리세롤(DAG) 농도의 측정 ... 478
실험 33-8 고압 액체 크로마토그래피와 전기화학적 검출기를 이용한 카테콜라민의 정량
제34장 뇌신경 조직 및 세포에 대한 면역화학적 검사 및 동소보합결합
실험 34-1 뇌신경 조직 절편 및 세포의 면역화학적 검사 ... 491
실험 34-2 노신경 조직 절편에 대한 동소보합결합법을 이용한 검사 ... 498
제Ⅳ부 생화학의 응용
제1편 식품
개요 ... 511
제35장 식품의 일반성분
실험 35-1 시료의 채취 및 제조 ... 513
실험 35-2 수분의 정량-오븐 건조법 ... 515
실험 35-3 회분의 정량-건식법 ... 518
실험 35-4 단백질의 정량-대량 Kjeldahl법 ... 519
실험 35-5 지방질의 정량 ... 522
실험 35-6 섬유질의 정량-AOAC법 ... 525
실험 35-7 환원당의 정량-Bertrand법 ... 527
실험 35-8 총 당의 정량-페놀-황산법 ... 530
제36장 식품의 특수성분 분석
실험 36-1 식품의 알칼리도 측정 ... 533
실험 36-2 칼슘의 정량-KMnO₄적정법 ... 534
실험 36-3 인의 정량-적정법 ... 535
실험 36-4 철의 정량-적정법 ... 536
실험 36-5 비타민 B₁의 정량-티오크롬 형광법 ... 538
실험 36-6 비타민 B₂의 정량-루미플라빈 형광법 ... 539
실험 36-7 총비타민 C의 정량-히드라진 비색법 ... 541
실험 36-8 비타민 C의 정량-AOAC적정법 ... 544
제2편 독성
개요 ... 549
제37장 생화학적 독성시험
1. 유전독성시험법
실험 37-1 미생물을 이용한 복귀 돌연변이 시험 ... 552
실험 37-2 설치류를 이용한 소핵시험 ... 555
실험 37-3 포유동물 배양세포를 이용한 염색체 이상시험 ... 557
2. 간독성
실험 37-4 AST, ALT 측정 ... 559
실험 37-5 Cytochrome P450 활성측정 ... 560
실험 37-6 Nitrophenol hydroxylase 활성측정 ... 563
실험 37-7 지질과산화 ... 563
3. 신장독성
실험 37-8 BUN 측정 ... 565
실험 37-9 Creatinine 측정 ... 566
4. 혈액독성
실험 37-10 적혈구의 hemolysis ... 567
실험 37-11 혈소판 LDH 유출 측정 ... 568
제3편 임상
개요 ... 573
제38장 혈액의 임상화학 검사
1. 채혈
실험 38-1 채혈법 ... 575
실험 38-2 전혈 및 혈장을 만드는 법 ... 576
실험 38-3 혈청을 만드는 법 ... 577
실험 38-4 혈액응고 방지 ... 577
2. 단백질
(1) 총단백질의 측정
실험 38-5 Biuret법에 의한 혈청 총단백질의 측정 ... 579
실험 38-6 Trichloroaceitc acid(TCA) 침전법에 의한 뇨중 총단백질의 측정 ... 580
실험 38-7 뇌척수액에서 총단백질의 측정 ... 581
실험 38-8 Bromcresolgreen(BCG)법에 의한 혈청알부민 측정 ... 583
(2) 전기이동
실험 38-9 혈청단백전기이동 ... 584
실험 38-10 면역고정전기이동 ... 584
실험 38-11 면역전기이동 ... 585
(3) 면역화학적 방법
3. 비단백질질소(Nonprotein nitrogen;NPN)
실험 38-12 우레아의 정량 ... 587
실험 38-13 크레아티닌의 정량 ... 588
4. 효소
실험 38-14 Aminotransferases(Transaminases) 활성 측정 ... 590
실험 38-15 Creatine kinase(CK) 활성 측정 ... 593
실험 38-16 Lactate dehydrogenase(LD) 활성 측정 ... 595
실험 38-17 Alkaline phosphatase 활성 측정 ... 596
실험 38-18 Gamma-glutamyltransferase 활성 측정 ... 598
5. 탄수화물
실험 38-19 당정량 ... 599
실험 38-20 케톤체 정량 ... 600
실험 38-21 당화단백질 정량 ... 601
실험 38-22 락트산염 정량 ... 602
6. 지질
실험 38-23 아포지단백 측정 ... 603
실험 38-24 지단백 측정 ... 603
실험 38-25 콜레스테롤 측정 ... 604
실험 38-26 트리글리세리드 측정 ... 606
7. 분자생물학적 검사
제39장 소화기계의 임상화학 검사
1. 위잔사 검사
실험 39-1 유리염화수소 측정 ... 611
실험 39-2 기저 산배출량, 최고 산배출량 및 최대 산배출량 측정 ... 612
2. 위장관의 호르몬
실험 39-3 가스트린 측정 ... 614
실험 39-4 콜레시스토키닌-판크레오지민 측정 ... 614
실험 39-5 세크레틴 측정 ... 615
실험 39-6 혈관 활성 장관성 폴리펩티드 측정 ... 616
실험 39-7 위억제 폴리펩티드(Gastric Inhibitory Polypeptide, GIP) 측정 ... 615
3. 위장관의 효소
실험 39-8 펩신 및 펩시노겐 측정 ... 616
실험 39-9 아밀라아제 측정 ... 617
4. 췌장 기능검사
실험 39-10 Lundh meal 검사 ... 621
실험 39-11 세크레틴 검사 ... 621
실험 39-12 Secretin-CCK검사 ... 621
실험 39-13 대변에서 트립신 및 키모트립신 측정 ... 622
실험 39-14 대변지방 검사 ... 622
실험 39-15 D-xylose 흡수시험 ... 624
제40장 뇨 검사
뇨의 일반성상
실험 40-1 채뇨법 ... 631
실험 40-2 글루코오스의 정성시험 ... 632
실험 40-3 단백질의 정성시험 ... 634
실험 40-4 혈액검사 ... 635
실험 40-5 빌리루빈뇨의 시험 ... 636
실험 40-6 뇨산의 정성시험 ... 637
실험 40-7 케톤체 시험 ... 638
뇨의 정량시험
실험 40-8 글루코오스의 정량 ... 639
실험 40-9 뇨의 총질소 정량-Kjeldahl법 ... 639
실험 40-10 크레아틴 및 크레아티닌의 정량 ... 639
실험 40-11 케토스테로이드의 정량 ... 640
실험 40-12 칼슘의 정량 ... 642
실험 40-13 염화물의 정량 ... 643
실험 40-14 인산염의 정량 ... 644
제41장 간의 기능검사
실험 41-1 빌리루빈의 정량-van den Bergh법(Diazo 반응) ... 647
실험 41-2 술포브로모프탈레인 정량 ... 649
실험 41-3 ICG 시험 ... 651
실험 41-4 세팔린-콜레스테롤 뭉침시험-Hanger법 ... 651
실험 41-5 티몰 혼탁도시험 ... 652
제42장 신장의 기능검사
실험 42-1 신 청소율 시험(renal clearance study) ... 655
실험 42-2 BUN 및 크레아티닌 검사 ... 656
실험 42-3 신 세뇨관 기능검사 ... 657
실험 42-4 신 혈장 류량 검사 ... 659
실험 42-5 선택지수(Selective Index, SI) 검사 ... 660
제43장 방사선면역분석법
실험 43-1 방사선면역분석법에 의한 호르몬의 정량 ... 661
부록
Ⅰ. 몇 가지 원소의 원자량 ... 667
Ⅱ. 산 및 염기의 농도 ... 667
Ⅲ. 정량적 단위들 ... 668
Ⅳ. pH 지시약 ... 670
Ⅴ. 완충용액 ... 671
Ⅵ. 황산암모늄 첨가에 의한 단백질의 분별분리 ... 676
Ⅶ. 260nm와 280nm에서의 흡광도 측정에 의한 단백질의 결정 ... 678
Ⅷ. 생화학 실험에서 쓰이는 몇 가지 동위원소 ... 679
Ⅸ. 원심분리기의 회전수와 중력배수(g) 값의 계산도표 ... 680
Ⅹ. 정상인의 혈청 성분표 ... 681
?. 정상인의 오줌 성분표 ... 682
?. 식품분석표 ... 683
ⅩⅢ. Bertrand 당 정량표 ... 685
ⅩⅣ. 플라스미드 pBluescript KS(Ⅱ)의 유전자지도 ... 688
ⅩⅤ. 상용대수표 ... 686
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